馮瑜菲 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
LAMP 技術(shù)在獸醫(yī)學(xué)上主要應(yīng)用于病原微生物的快速檢測，包括細(xì)菌、病毒、真菌、支原體、寄生蟲等，在臨床疾病診斷、食品衛(wèi)生檢驗及環(huán)境監(jiān)測方面也應(yīng)用廣泛，LAMP 同時還應(yīng)用于動物胚胎的性別鑒定、腫瘤基因檢測及原位擴增等。
細(xì)菌的檢測。Iwamoto 等針對 gyrB 基因設(shè)計特異性引物對痰樣品中的肺結(jié)核分支桿菌（Mycobacterium tuberculosis）進(jìn)行了 LAMP 檢測，檢測下限為 5~50 個 DNA 拷貝且在 35min內(nèi)完成反應(yīng)。Hara-Kudo 建立了沙門氏菌的 LAMP 檢測體系，檢測靈敏度達(dá)到了 2.2cfu/test tube，對雞蛋中沙門氏菌的模擬實際檢測靈敏度達(dá)到了 2.8cfu/testtube。Yano 等在使用 LAMP 方法對腸毒素大腸桿菌的 LT1 和 ST1基因進(jìn)行檢測時，通過加入環(huán)引物的方式使擴增時間從 60 min 縮至 35 min。朱海等建立了檢測大腸桿菌 O157:H7 的 LAMP 檢測方法。吳詩敏等針對副豬嗜血桿菌常規(guī)檢測目的基因 16S rRNA 基因建立 LAMP 檢測方法，結(jié)果表明，LAMP 的靈敏性高于常規(guī) PCR 方法 103倍。
病毒的檢測。Okamoto 建立了水痘帶狀皰疹病毒（vzv）的 LAMP 檢測方法，其特異性、靈敏度、陽性檢測率分別達(dá)到了熒光定量 PCR 檢測的 87%、100%、100%。Ihira 建立了人類皰疹病毒 6 型（HSV-6）的 LAMP 檢測方法，通過改進(jìn)引物濃度，使其靈敏度達(dá)到了 25copies/tube。Enomoto 分別建立了人類皰疹病毒 1型（HSV-1）和人類皰疹病毒 2 型（HSV-2）的 LAMP 檢測方法，檢測下限分別達(dá)到了500copies/tube 和 1000copies/tube。Poon 等建立了禽流感病毒 H1~H3的 LAMP 檢測方法。該方法靈敏度比常規(guī) PCR 高且可以通過肉眼觀察反應(yīng)所生成的白色沉淀物來快速鑒定結(jié)果。Suzuki 建立了巨細(xì)胞病毒（CMV）的 LAMP檢測方法，靈敏度達(dá)到 500copies/tube，并對定量檢測進(jìn)行了嘗試，標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.944。Iwata 建立了 EB 病毒（EBV）的 LAMP 檢測方法，靈敏度和特異性分別達(dá)到了熒光定量 PCR 檢測的 86.4%和 100%。Dukes 針對口蹄疫病毒的 3D RNApolymerase 基因建立了 RT-LAMP 檢測方法，檢測下限能達(dá)到 10 個拷貝并且結(jié)果可通過肉眼判斷（Dukes J P et al，2006）。Kurosaki 等對埃博拉病毒（Zaire Ebola virus）進(jìn)行了 Real-time RT-LAMP 檢測的研究，實驗表明 26 min 內(nèi)即可測到 20 個拷貝的 RNA。
真菌和寄生蟲的檢測。Ohori 等根據(jù)奔馬性赭粉菌種屬 LSU rDNA 序列的 D1/D2 區(qū)域設(shè)計特異性引物應(yīng)用于 LAMP 檢測，分別成功地從該真菌的 DNA 與試驗感染小鼠腦與脾中檢出該病原。Poon 等建立了惡性瘧原蟲的 LAMP 檢測方法，與常規(guī) PCR相比，LAMP 檢測不需要 DNA 的純化，能大大提高疾病檢測的效率和有效地控制疾病的傳播。Iseki 等應(yīng)用 LAMP 技術(shù)，針對牛巴貝蟲與二聯(lián)脈巴貝蟲管狀嵌合蛋白-1 基因（Rhoptry-associated protein-1 genes）設(shè)計了 2 套引物，其中 2 對引物，建立了針對這兩種寄生蟲的多重 LAMP 的診斷方法。
LAMP 技術(shù)與其他技術(shù)的聯(lián)合使用。Hataoka 等將 LAMP 技術(shù)和電泳技術(shù)相結(jié)合建立了聚丙烯酰胺凝膠基因芯片，用來檢測和分析特異性基因類型。申建維等在檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌時將核酸雜交和 LAMP 技術(shù)進(jìn)行結(jié)合，用多重 LAMP同時擴增金黃色葡萄球菌耐藥基因 mecA 和 femA，并在反應(yīng)體系中加入 2 種不同熒光探針，可分別與 mecA 和 femA 基因的擴增產(chǎn)物互補結(jié)合，最后檢測反應(yīng)管中的 2 種熒光值。實驗表明該方法的最低檢測限為 10 CFU/ml，與藥敏試驗結(jié)果相比較，靈敏度 99.0%，特異性 90.9%。Lam 等發(fā)明了一種以聚丙烯酰胺凝膠為基礎(chǔ)的微孔 LAMP 反應(yīng)，可以減少模板和引物的用量，能夠檢測一個 DNA 分子，并且能在 1 h 內(nèi)完成反應(yīng)。
