馮瑜菲 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
LAMP 與獸醫(yī)常用的核酸擴(kuò)增方法相比具有如下優(yōu)點(diǎn)：
⑴使用設(shè)備簡單。由于 LAMP 反應(yīng)處于恒定溫度的環(huán)境下，故只需要一個(gè)簡單的恒溫器，如水浴鍋即可，而不需要昂貴的反應(yīng)儀器，為基層檢驗(yàn)檢疫部門提供方便。
⑵操作簡單。LAMP 反應(yīng)的操作步驟與 PCR 基本相同。但由于所使用的 Bst DNA 聚合酶是一種不耐熱的 DNA 聚合酶，因此需要在模板預(yù)變性以后再加樣。而對(duì)于 RNA 的擴(kuò)增，只需要在反應(yīng)體系中加入特定的逆轉(zhuǎn)錄酶就可以同步進(jìn)行（RT-LAMP），而不需要特殊的試劑及儀器。
⑶靈敏度高。LAMP方法所用擴(kuò)增模板可低至 10 拷貝或更少，一般能檢測到比 PCR 低 10-100 倍的拷貝數(shù)，并且基于 LAMP 方法建立的 RNA 分子檢測技術(shù) RT-LAMP，其靈敏度也是 RT-PCR 的 100 倍，這對(duì)于低濃度的病毒數(shù)量或無癥狀的病毒攜帶者的檢測即具有良好的效果。
另外，在動(dòng)物胚胎性別的判斷中，基于 LAMP 的動(dòng)物胚胎性別檢測方法具有很高的敏感性和準(zhǔn)確性，用 3~5 個(gè)細(xì)胞樣本即可很準(zhǔn)確地判斷性別，實(shí)驗(yàn)表明用 1~2 個(gè)細(xì)胞的準(zhǔn)確性也可達(dá)到 75.0%~94.4%。
⑷特異性強(qiáng)。由于 LAMP 通過 4 條引物與靶序列上的 6 個(gè)特異性部位準(zhǔn)確結(jié)合來產(chǎn)生擴(kuò)增，而 6 個(gè)區(qū)域中任何區(qū)域與引物不匹配均不能進(jìn)行核酸擴(kuò)增。因此，能獲得比 PCR 更高的特異性。
⑸擴(kuò)增效率高。因?yàn)椴恍枰A(yù)先的雙鏈 DNA 熱變性，避免了溫度循環(huán)而造成的時(shí)間損失，整個(gè)核酸擴(kuò)增在 1 h 內(nèi)即可完成，且產(chǎn)物可擴(kuò)增至 109倍，達(dá)到 0.5mg/ml。若同時(shí)使用環(huán)引物，則反應(yīng)時(shí)間可以減少 1/3~1/2，通常在 20~30 min 即可檢測到擴(kuò)增產(chǎn)物。
⑹耐受性強(qiáng)。Kaneko 等對(duì) LAMP 進(jìn)行了培養(yǎng)基成分耐受性的研究，發(fā)現(xiàn) LAMP 方法對(duì)各種培養(yǎng)基成分具有較強(qiáng)的耐受性，樣品可以不進(jìn)行純化而直接進(jìn)行 LAMP 擴(kuò)增。
