顧江萍 上海交通大學(xué)
基因缺失疫苗通過(guò)人為的使病毒某一基因完全缺失或發(fā)生突變從而使毒力減弱，感染宿主只能誘發(fā)保護(hù)性免疫力而不會(huì)引起疾病的發(fā)生。Ballesteros等畜牧研究人員嘗試改變TGEV的S基因214位和655位2個(gè)堿基，制成重組疫苗，進(jìn)行呼吸道和腸道組織感染，證明僅改變655位堿基，就可對(duì)呼吸道TGEV產(chǎn)生特異性反應(yīng)，而219位堿基的改變則導(dǎo)致TGEV腸嗜性的丟失。證明S基因決定病毒對(duì)組織的親嗜性。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，S基因219位堿基附近存在TGEV受體結(jié)合部位。S.Riffault等研究發(fā)現(xiàn)缺失S基因的TGEV能夠誘導(dǎo)干擾素(IFN)分泌，由于其缺失S基因，因此不產(chǎn)生任何毒性，這為研制TGEV基因缺失疫苗奠定了一定的基礎(chǔ)。
近幾年，在病毒感染性克隆構(gòu)建成功的基礎(chǔ)上，疫苗研究不再局限于利用免疫原性基因來(lái)構(gòu)建基因疫苗,出現(xiàn)了感染性克隆新型疫苗。其通過(guò)構(gòu)建病毒全長(zhǎng)cDNA，利用體外轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)得到感染性轉(zhuǎn)錄本,然后用其轉(zhuǎn)染易感細(xì)胞系或動(dòng)物體，得到感染性病毒粒子(又稱感染性克隆),再利用基因缺失、突變、嵌合等反向遺傳技術(shù)將這種感染性病毒致弱,解除其對(duì)宿主細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)的抑制作用,但保留了野毒的免疫原性及其正常的增殖能力。與以往的基因疫苗相比，感染性克隆基因疫苗既繼承了基因疫苗的優(yōu)點(diǎn),又克服了基因疫苗表達(dá)量低的缺憾。因?yàn)槔碚撋匣蛞呙缈梢栽丛床粩嗟母咚奖磉_(dá)免疫原,事實(shí)上目前的基因疫苗很難達(dá)到預(yù)期的表達(dá)水平,其關(guān)鍵在于外源基因能真正進(jìn)入細(xì)胞或細(xì)胞核的量很少。感染性克隆疫苗則不然,因?yàn)樗亲鳛橐环N毒力減弱的活毒進(jìn)入機(jī)體內(nèi)的,具有正常的生活周期,卻又沒(méi)有致病性或致病力很弱,所以它在體內(nèi)的表達(dá)量要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于以往的基因疫苗。我國(guó)開(kāi)展反向遺傳學(xué)的研究與國(guó)外相比較晚，所取得的結(jié)論性成果也甚少?，F(xiàn)在國(guó)內(nèi)研究較多的是口蹄疫感染性克隆疫苗，但尚無(wú)TGEV相關(guān)報(bào)道。
