張靜 上海交通大學(xué)
豬鏈球菌 2 型溶血素(hemolysin)，也稱(chēng)豬溶素(suilysin)，為豬鏈球菌 2 型產(chǎn)生的釋放至細(xì)胞外的具有細(xì)胞毒性作用的物質(zhì)，其分子量為 54 kDa，被認(rèn)為 SS2的毒力因子之一。sly 基因尤其是 3'端在不同分離株內(nèi)是最保守的，這一序列不僅在鏈球菌中高度保守，也在整個(gè)溶血素家族中高度保守。畜牧研究人員普遍認(rèn)為溶血素屬于巰基活化細(xì)胞毒素家族(Thiol-activated cytolysin, TACY)，能刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫保護(hù)作用。
1994 年，Jacobs AA 等用提純的 SS2 溶血素免疫 BALB/c 小鼠，結(jié)果顯示小鼠能得到完全的免疫保護(hù)，表明 SS2 溶血素具有免疫保護(hù)作用，研究發(fā)現(xiàn)各種血清型的豬鏈球菌均能產(chǎn)生生化和免疫特性相似的溶血素，可推斷以溶血素為免疫原的疫苗有可能對(duì)其他血清型的豬鏈球菌感染產(chǎn)生交叉保護(hù)作用。1996 年，Jacobs AA 等研究了SS2溶血素和SS2的其他細(xì)胞外抗原(extracellular antigens)對(duì)豬的免疫保護(hù)作用，對(duì)比結(jié)果顯示 SS2 溶血素的免疫保護(hù)效果明顯優(yōu)于不含溶血素的其它細(xì)胞外抗原。2003 年 Lun S等研究認(rèn)為，SS2 溶血素在刺激細(xì)胞因子的釋放和起始免疫過(guò)程中具有重要作用。
2007 年王華等擴(kuò)增了 SS2 四川株 653bp 的 SLY 主要抗原基因，該段基因可表達(dá) 43kDa 的融合蛋白，并可與 SS2 抗血清發(fā)生反應(yīng)，表明擴(kuò)增的片段中含有該蛋白的抗原位點(diǎn)，小鼠試驗(yàn)結(jié)果表明，該蛋白的菌苗效應(yīng)為 60%（菌苗臨床效應(yīng)%=（對(duì)照組疾病指數(shù)－實(shí)驗(yàn)組疾病指數(shù)）/對(duì)照組疾病指數(shù)×100%），全菌滅活苗組的菌苗效應(yīng) 80%。2008 年楊影擴(kuò)增出 SS2 SLY 全長(zhǎng)基因，在大腸桿菌表達(dá)的融合蛋白大小為 57kDa，免疫轉(zhuǎn)印顯示該蛋白具有良好的免疫原性。雖然 SS2 SLY 具有很好的免疫原性，但研究發(fā)現(xiàn)大量從病豬體內(nèi)分離到的 SS2 菌株都不具備該蛋白，因而其使用范圍受到了一定限制。
38kDa 蛋白位于 SS2 細(xì)菌表面，可從細(xì)胞壁提取物中分離到。2005 年Okwumabua O 等在篩選豬球菌候選疫苗和診斷抗原的實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)一個(gè)長(zhǎng)為2.0kb 的基因片段，該基因編碼含有 445 個(gè)氨基酸殘基的多肽，大小為 38kDa，故稱(chēng)之為 38kDa 蛋白。對(duì)來(lái)自美國(guó)、加拿大、歐洲的不同血清型豬鏈球菌進(jìn)行Southern 分析發(fā)現(xiàn)，除 20、26、32、33 血清型，其它血清型均含有該基因，可表達(dá)大小為 38kDa 的蛋白。用純化的蛋白免疫 5 頭豬，每?jī)芍苊庖咭淮?，二免?14 天檢測(cè)出較高的抗體效價(jià)，用同源 SS2 野生株攻擊，僅一頭出現(xiàn)短暫的關(guān)節(jié)炎及沉郁臨床癥狀，生理鹽水對(duì)照組 5 頭豬均出現(xiàn)臨床癥狀，死亡 3 頭。由此可見(jiàn)，38kDa 蛋白可作為亞單位疫苗開(kāi)發(fā)的候選蛋白。
2007 年王華等擴(kuò)增了 SS2 四川株 38kDa 蛋白約 462bp 的片段，通過(guò)原核表達(dá)得到大小為 35kDa 的融合蛋白，該蛋白可與 SS2 抗血清發(fā)生反應(yīng)，說(shuō)明擴(kuò)增的片段中含有該蛋白的抗原位點(diǎn)，將純化后的蛋白免疫小鼠，可產(chǎn)生 60%的菌苗保護(hù)效應(yīng)。
