由于消費(fèi)者對于蛋殼外觀的關(guān)注，商品蛋蛋殼質(zhì)量直接影響其在市場上的銷售價(jià)格和銷售時(shí)間，尤其是品牌雞蛋。由于飼料營養(yǎng)、飼養(yǎng)管理和養(yǎng)殖環(huán)境因素的影響，蛋殼質(zhì)量缺陷（如沙皮蛋、軟殼蛋、畸形蛋等）成為養(yǎng)殖中的常見問題。但近年來另外一種蛋殼問題非常突出，主要表現(xiàn)為蛋殼上有暗斑（圖1），這種暗斑不是在蛋殼的表面，而是在內(nèi)部。通過照蛋器可以明顯地看到暗斑部分密度小于正常雞蛋（圖2）。由于這種點(diǎn)狀暗斑很像水滲出蛋殼表面，業(yè)界稱這種雞蛋為水印蛋。
    目前水印蛋在中國南方和北方地區(qū)都有發(fā)生。根據(jù)某公司2016年的調(diào)研發(fā)現(xiàn)，四川成都超市里銷售的6個(gè)品牌雞蛋都存在水印蛋問題，發(fā)生率在10%~30%。水印蛋問題是當(dāng)前商業(yè)化蛋雞養(yǎng)殖場和品牌蛋企業(yè)面臨的重要難題，但關(guān)于水印蛋的問題很少有研究報(bào)道。事實(shí)上，水印蛋的產(chǎn)生是因?yàn)榈皻?nèi)層的形成不完善所導(dǎo)致的，而蛋殼內(nèi)層的發(fā)育受到蛋殼內(nèi)膜結(jié)構(gòu)的影響，蛋殼的沉積需要蛋殼膜表面的成核點(diǎn)，如果蛋殼內(nèi)膜發(fā)育不完善，蛋殼的形成可能會受到影響。而蛋殼膜的發(fā)育和蛋殼的沉積與微量元素有直接的關(guān)系（圖3）。因此微量元素的缺乏可能會導(dǎo)致蛋殼問題的產(chǎn)生。已有大量研究表明，在飼料中補(bǔ)充微量元素可以改善蛋殼的強(qiáng)度和厚度，但是目前還沒有關(guān)于微量元素和水印蛋的研究報(bào)道。
    蛋殼內(nèi)膜的發(fā)育和蛋殼的抗氧化水平也有一定的關(guān)聯(lián)。水印蛋的高發(fā)期是在炎熱季節(jié)，而蛋雞在炎熱季節(jié)更容易出現(xiàn)熱應(yīng)激現(xiàn)象和氧化應(yīng)激，內(nèi)源性抗氧化劑愛克多（Agrado）可以減少體內(nèi)的氧化應(yīng)激，但是否對蛋殼的品質(zhì)有幫助，目前沒有相關(guān)研究。本研究旨在通過建立水印蛋評分體系，并結(jié)合導(dǎo)致水印蛋產(chǎn)生的營養(yǎng)和生理機(jī)制，探討在飼料中添加螯合微量元素和內(nèi)源性抗氧化劑改善水印蛋的可行性，以期為蛋雞養(yǎng)殖業(yè)提供可行的解決方案和參考。

    1、材料與方法

    1.1、諾偉司水印蛋評分系統(tǒng)的建立

    蛋雞剛產(chǎn)出的蛋并沒有水印，水印蛋是在雞蛋進(jìn)入到市場之后的3~5d才逐漸出現(xiàn)的。因此需要找到一個(gè)能夠量化水印蛋嚴(yán)重程度的方法。諾偉司國際公司技術(shù)部通過對水印蛋的結(jié)構(gòu)研究發(fā)現(xiàn)，所有出現(xiàn)水印的雞蛋，在照蛋器下都可以看到透光的斑點(diǎn)（圖2），通過近240個(gè)水印蛋的照蛋分析發(fā)現(xiàn)，只要有暗斑的部位在照蛋器下的透光面積就大，小點(diǎn)狀的亮斑在蛋殼上沒有暗斑。水印蛋的暗斑和照蛋器下的亮斑成100%的相關(guān)性?；谝陨匣A(chǔ)，諾偉司技術(shù)部構(gòu)建了水印蛋蛋殼評分系統(tǒng)（圖4）。
    根據(jù)在光照下的透光斑點(diǎn)嚴(yán)重程度，將雞蛋的蛋殼分為6個(gè)級別：0分為優(yōu)，只有極少數(shù)細(xì)微亮點(diǎn)，室外條件下蛋殼表面無黑斑；1分為優(yōu)良，分布少量細(xì)微亮點(diǎn)，室外條件下蛋殼表面無黑斑；2分為良，分布較多細(xì)微亮點(diǎn)，室外條件下蛋殼表面無黑斑；3分為中度，分布大量細(xì)微亮點(diǎn)，室外條件下蛋殼表面有少量黑斑；4分為重度，表面密布細(xì)微亮點(diǎn)和大亮點(diǎn)，室外條件下蛋殼表面有較多黑斑；5分為極重度，表面密布各種亮點(diǎn)，室外條件下蛋殼表面有大量黑斑。

    1.2、試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    本研究在四川某公司蛋雞養(yǎng)殖場進(jìn)行，試驗(yàn)期4周。試驗(yàn)選取1600只34周齡產(chǎn)蛋高峰期蛋雞，本批蛋雞所產(chǎn)雞蛋水印蛋的發(fā)生率高達(dá)40%以上。試驗(yàn)分為4個(gè)處理，每個(gè)處理4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)100只蛋雞。對照組使用該公司蛋雞日糧（設(shè)為基礎(chǔ)日糧），其中微量元素均為無機(jī)微量元素（硫酸鹽），Zn、Cu和Mn分別為80、8、80mg/kg；螯合微量元素組在每噸基礎(chǔ)日糧上額外添加125g羥基蛋氨酸螯合鋅（20mg/kgZn）和25g羥基蛋氨酸螯合銅（4mg/kg），羥基蛋氨酸螯合鋅和銅由諾偉司國際公司提供，同時(shí)在基礎(chǔ)日糧中減去螯合微量元素中的蛋氨酸123g/t，平衡日糧中的蛋氨酸水平。抗氧化劑組在基礎(chǔ)日糧上添加100g/t的愛克多。螯合微量元素+抗氧化劑組在螯合微量元素組日糧基礎(chǔ)上添加100g/t的內(nèi)源性抗氧化劑愛克多，愛克多由諾偉司國際公司提供，同樣在基礎(chǔ)日糧中減去螯合微量元素中的蛋氨酸123g/t。

    1.3、飼養(yǎng)管理

    根據(jù)該公司蛋雞養(yǎng)殖標(biāo)準(zhǔn)程序飼養(yǎng)和管理試驗(yàn)蛋雞，自由采食和飲水。進(jìn)行日常觀察（包括死亡率和淘汰率，并指定具體的處理、籠、日期和數(shù)量）、蛋雞舍溫度檢測及供料和供水監(jiān)測。

    1.4、觀測和檢測指標(biāo)

    每天觀察2次，記錄任何不正常的現(xiàn)象，統(tǒng)計(jì)產(chǎn)蛋率、死亡率、發(fā)病率、跛腳率、羽毛背禿率、啄羽、啄肛及脫肛等情況。統(tǒng)計(jì)每天各重復(fù)試驗(yàn)雞蛋中無殼蛋、破殼蛋（包括裂紋蛋）、軟殼蛋及畸形蛋發(fā)生數(shù)量，計(jì)算百分比。非正常雞及時(shí)從試驗(yàn)群中剔除。按重量數(shù)記錄用于每重復(fù)的飼料供應(yīng)量。根據(jù)料槽中剩料量、已記錄的料袋中的剩余量，計(jì)算飼料剩余量。計(jì)算每天產(chǎn)蛋率、日產(chǎn)蛋重及蛋重（按重復(fù)數(shù)），并計(jì)算料蛋比。在試驗(yàn)第4周，分別從每個(gè)處理的每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取15枚雞蛋，用于測定蛋殼強(qiáng)度和蛋殼厚度；從每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取30枚雞蛋，用手機(jī)手電筒照蛋（圖5），由3個(gè)操作人員同時(shí)用諾偉司水印蛋評分系統(tǒng)評定水印蛋的嚴(yán)重程度。
    1.5、統(tǒng)計(jì)分析

    所有數(shù)據(jù)通過SPSS22.00統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，用LSD進(jìn)行處理間的顯著性分析，P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著。

    2、結(jié)果與分析

    2.1羥基蛋氨酸螯合微量元素和抗氧化劑對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

    由表1可知，與對照組相比，各試驗(yàn)組對蛋雞的生產(chǎn)性能均無顯著影響，但是螯合微量元素+抗氧化劑組和抗氧化劑組的蛋雞產(chǎn)蛋率偏高，抗氧化劑組的料蛋比偏低。

    2.2、羥基蛋氨酸螯合微量元素和抗氧化劑對蛋殼質(zhì)量的影響

    由表2可知，羥基蛋氨酸螯合微量元素和抗氧化劑對蛋殼厚度和蛋殼強(qiáng)度影響并不顯著?？寡趸瘎?螯合微量元素組蛋殼厚度和強(qiáng)度略好于對照組、羥基蛋氨酸螯合微量元素組、抗氧化劑組（P>0.05）。與對照組相比，螯合微量元素組極顯著地降低了水印蛋的發(fā)生率（P<0.01），也顯著低于螯合微量元素+抗氧化劑組和抗氧化劑組（P<0.05）。螯合微量元素和抗氧化劑互作或者抗氧化劑單獨(dú)添加均可顯著降低水印蛋的發(fā)生（P<0.05）。試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，雖然畸形蛋的比例很低，但是螯合微量元素組和螯合微量元素+抗氧化劑組與對照組相比顯著降低了畸形蛋率（P<0.05）。各組破蛋率無顯著差異。

    2.3、羥基蛋氨酸螯合微量元素和抗氧化劑對水印蛋評分的影響

    由表3可知，在測定的120枚雞蛋中，螯合微量元素組0分蛋和1分蛋的數(shù)量極顯著提高，而對照組只有4個(gè)0分蛋和12個(gè)1分蛋?？寡趸瘎┨砑咏M也提高了0分蛋和1分蛋的比例，但是和螯合微量元素組相比，3分蛋的發(fā)生率近35%，而螯合微量元素組只有11.6%。螯合微量元素和抗氧化劑互作也提高了優(yōu)質(zhì)蛋殼的比例，其中0分蛋達(dá)到22枚，1分蛋32枚，但沒有加性效應(yīng)。通過諾偉司水印蛋評分發(fā)現(xiàn)，對照組評分平均值為2.44，螯合微量元素組最低，為1.43，螯合微量元素+抗氧化劑組為1.70，而抗氧化劑組為1.97。通過諾偉司水印蛋評分可以看出，螯合微量元素極顯著降低了水印蛋的發(fā)生率（P<0.01），螯合微量元素和抗氧化劑互作也顯著降低了水印蛋評分（P<0.05），但是抗氧化劑添加組和對照組相比差異不顯著。

    3、討論

    本研究通過對水印蛋的照蛋分析發(fā)現(xiàn)，凡有水印的蛋殼部分透光程度就很高，說明出現(xiàn)水印的部位蛋殼的致密度低于其他部分。在雞蛋儲存過程中，有空隙部分的蛋殼膜在蛋內(nèi)部壓力下變得較薄，蛋清的水分容易蒸發(fā)到空隙中，形成了人們?nèi)庋劭吹降陌瞪唿c(diǎn)，這種現(xiàn)象更容易出現(xiàn)在炎熱季節(jié)。本研究通過水印蛋產(chǎn)生的結(jié)構(gòu)機(jī)理創(chuàng)建水印蛋評分體系，這對于研究水印蛋的發(fā)生及水印蛋的解決方案提供了一套量化的標(biāo)準(zhǔn)。盡管該標(biāo)準(zhǔn)并不能反映蛋殼的所有問題，但是能夠較為客觀地評判水印蛋的嚴(yán)重程度。這對于品牌雞蛋企業(yè)具有實(shí)際的指導(dǎo)意義。品牌雞蛋企業(yè)可以在打碼包裝之前，通過照蛋評分，將3分及以上的雞蛋挑出作為普通雞蛋銷售，降低了在超市里銷售期間被退貨的風(fēng)險(xiǎn)，這對于企業(yè)品牌形象的建立和維護(hù)也非常重要。

    蛋殼的致密度和礦化程度有關(guān)，其中影響蛋殼碳酸鈣沉積的除了常規(guī)的日糧鈣磷水平和維生素水平外，微量元素發(fā)揮了很重要的作用。根據(jù)蛋殼測定的結(jié)果，對照組和試驗(yàn)組在蛋殼厚度和蛋殼強(qiáng)度指標(biāo)方面沒有顯著性差異。說明水印蛋的產(chǎn)生可能與鈣磷營養(yǎng)沒有直接關(guān)系，在實(shí)際生產(chǎn)中配方師通過提高鈣磷水平并不能夠降低水印蛋的發(fā)生率，而局部的蛋殼致密度不高和蛋殼內(nèi)膜的功能完整性有重要的相關(guān)性。

    因?yàn)榈皻つけ砻嬗刑妓徕}結(jié)晶附著的成核位點(diǎn)，這些位點(diǎn)含有黏多糖和膠原蛋白，這些蛋白的合成與微量元素參與的輔酶活性有關(guān)，以鋅為輔酶的碳酸酐酶對蛋殼的形成和蛋殼的致密度直接有關(guān)，而銅是賴氨酰氧化酶的輔酶，在蛋殼膜膠原蛋白的形成和交聯(lián)過程中發(fā)揮重要作用，缺銅同樣可能產(chǎn)生蛋殼質(zhì)量下降問題。

    水印蛋的產(chǎn)生可能與蛋殼形成的初期有關(guān)，如果蛋殼形成過程中一部分的蛋殼沒有直接附著在蛋殼膜上，這部分會產(chǎn)生搭橋，在蛋殼內(nèi)部形成比較大的空隙，這些空隙的透光性要高于完整的蛋殼?；蛘叩皻つげ糠治恢玫某珊宋稽c(diǎn)的碳酸酐酶活性低于正常水平，在蛋殼膜表面鈣化結(jié)晶過程中，該部位的碳酸鈣沉積低于正常部位，從而導(dǎo)致了蛋殼局部位置致密度不高，透光性增加。Bai等研究表明，在蛋雞飼料中添加20ppm的羥基蛋氨酸螯合鋅和4ppm羥基蛋氨酸螯合銅顯著提高了蛋殼的強(qiáng)度和厚度。本研究表明，通過在商品飼料中額外添加20mg/kg羥基蛋氨酸螯合鋅和4mg/kg羥基蛋氨酸螯合銅極顯著地降低了水印蛋的發(fā)生率，說明水印蛋的產(chǎn)生可能與蛋雞機(jī)體內(nèi)微量元素鋅和銅的缺乏有關(guān)。

    由于蛋雞飼料具有高鈣的特性，嚴(yán)重影響無機(jī)微量元素的吸收，筆者通過雞蛋中鋅含量的計(jì)算，發(fā)現(xiàn)蛋雞每天采食和利用的30%左右鋅通過雞蛋排出。這種長期的高產(chǎn)會導(dǎo)致蛋雞體內(nèi)微量元素的流失和缺乏。微量元素鋅和銅的缺乏會影響到蛋殼形成過程中碳酸鈣的沉積，從而可能導(dǎo)致水印蛋。而羥基蛋氨酸螯合微量元素避免了高鈣和植酸等抗?fàn)I養(yǎng)因子對微量元素的拮抗，有效地補(bǔ)充了蛋雞鋅和銅的不足，從而降低了水印蛋的發(fā)生率。

    本研究也發(fā)現(xiàn)，內(nèi)源性抗氧化劑愛克多也降低了水印蛋的發(fā)生率，這可能和內(nèi)源性抗氧化劑提高機(jī)體代謝水平有關(guān)，但目前未找到內(nèi)源氧化和蛋殼質(zhì)量的相關(guān)研究。但Felver-Gant等研究發(fā)現(xiàn)，愛克多可以提高熱應(yīng)激條件下的蛋雞抗氧化水平，并提高血液中維生素E和維生素A的水平，這可能是愛克多能夠降低水印蛋的原因，但有關(guān)這方面的推斷還需要進(jìn)一步的研究。在本試驗(yàn)中，在羥基蛋氨酸螯合微量元素組減去123g/t蛋氨酸，以羥基蛋氨酸螯合微量元素中的蛋氨酸作為部分蛋氨酸源，并沒有影響到蛋雞的采食量、蛋重和料蛋比，說明羥基蛋氨酸螯合微量元素中的羥基蛋氨酸具有100%的生物學(xué)效價(jià)，這和Yi等在肉雞上的研究結(jié)果一致。

    4、結(jié)論

    本試驗(yàn)條件下，添加螯合微量元素和螯合微量元素與抗氧化劑互作均可極顯著或顯著降低水印蛋的發(fā)生率和水印蛋評分，但單獨(dú)添加抗氧化劑對降低水印蛋的發(fā)生率和水印蛋評分的影響不顯著。添加螯合微量元素和抗氧化劑試驗(yàn)組對蛋雞產(chǎn)蛋率、采食量、料蛋比、蛋殼厚度和強(qiáng)度均無顯著影響。

   （孫得發(fā)  中國畜牧雜志）