摘要：通過臨床免疫效果的監(jiān)測，對比研究母源抗體對豬瘟兔化弱毒苗及E2基因工程苗免疫效力的干擾。結果表明，當母源抗體平均阻斷率＞70%時，其對豬瘟兔化弱毒苗存在顯著干擾（免疫前、一免后、二免后平均阻斷率分別為86.6%、58.4%、67.3%），而對E2重組苗幾乎不干擾（免疫前、一免后、二免后平均阻斷率分別為86.1%、73.3%、81.4%）；在低水平母源抗體時（平均阻斷率＜40%），2種疫苗均能迅速刺激機體產(chǎn)生相應的免疫應答。

    本次研究結果表明E2基因工程苗既能產(chǎn)生較好的免疫應答反應同時又可對抗母源抗體的干擾。

    關鍵詞：豬瘟；E2基因工程苗；母源抗體

    豬瘟（Classical?Swine?Fever，CSF）是由豬瘟病毒（CSFV）引起豬的一種世界性的高度接觸性傳染病，被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列入OIE疾病名錄。免疫接種是控制豬瘟流行的主要策略，弱毒疫苗如我國的C株對該病的防控發(fā)揮了積極作用，但單純依賴弱毒疫苗來消除CSF還有一定的困難，因為其缺乏區(qū)分疫苗免疫及野毒感染的特征，且易受母源抗體干擾，因此，一種能區(qū)分疫苗株、野毒株，同時可抵抗母源抗體干擾的新型豬瘟苗有利于我國豬瘟的防控及凈化。

    近年來，新型疫苗研究顯示，DNA疫苗、重組基因苗、亞單位苗等具有抗母源抗體干擾的特征。為了解天康生物制備的E2重組桿狀病毒試驗滅活苗是否具有抗母源抗體干擾性能，本研究將該苗與兔化弱毒苗同時接種斷奶仔豬，對比監(jiān)測母源抗體對免疫的影響。

    1、材料與方法

    1.1、疫苗及主要試劑

    豬瘟兔化弱毒疫苗（ST細胞源，購自廣東某公司）；E2重組基因工程苗（由天康生物提供）；CSFV阻斷ELISA抗體檢測試劑盒（購自IDEXX公司）。

    1.2、試驗方法

    1.2.1、試驗設計

    試驗于2017年5月1日—7月10日在郴州某種豬場（A、B兩區(qū)）進行，為期70d。兩區(qū)各選斷奶仔豬300頭，均在35日齡進行豬瘟第一次免疫，63日齡進行二免，A區(qū)仔豬使用弱毒苗（簡稱弱毒組），B區(qū)仔豬使用E2重組基因工程苗（簡稱E2組）。

    試驗豬的飼養(yǎng)管理及其他疫苗免疫均按本場程序進行，保證正常的通風和溫度、濕度。試驗期間如有明顯疾病發(fā)生，如嚴重腹瀉、肢體傷殘、氣喘等，予以淘汰。

    1.2.2、采血與檢測

    每組在免疫前隨機抽取15頭進行采血，并記錄耳號，隨后在二免前、二免后一個月對這些豬進行采血，利用豬瘟阻斷ELISA抗體檢測試劑盒（包被抗原為E2蛋白）檢測豬瘟特異性抗體。

    1.2.3、判定標準

    豬瘟抗體ELISA檢測試驗成立條件：陰性對照平均OD450＞0.50，陽性對照阻斷率＞50%。判定標準：阻斷率＜30%為陰性，30%≤阻斷率≤40%為可疑，阻斷率＞40%為陽性。

    2、結果

    試驗仔豬均在35d進行豬瘟首次免疫，63d進行二免，在每次免疫前及二免后一個月收集血清進行豬瘟抗體檢測，母源抗體對豬瘟兔化弱毒苗及E2基因工程苗的影響見表1及圖1。
    E2組有3頭跟蹤仔豬因疾病原因而淘汰。在免疫前，E2組母源抗體水平還維持較高水平（平均阻斷率69.3%，陽性率83.3%），弱毒組半數(shù)轉陰（平均阻斷率為47.8%，陽性率為53.3%）；一免后，E2組平均阻斷率稍有下降為65.6%，但全部轉陽，而弱毒組平均阻斷率為48.6%，陽性率為73.3%；二免后，兩組抗體水平均上升，平均阻斷率均在75%以上。

    以阻斷率70%作為分界線，低于70%為中低水平，兩種苗在中低水平情況下均能很好的誘導抗體的產(chǎn)生（圖2）。
    在高抗體水平下（阻斷率＞70，圖3），母源抗體對弱毒苗的干擾很明顯，免疫前平均阻斷率為86.6%，一免后降為58.4%，二免后稍有回升但仍較低為67.3%，而對E2基因工程苗的干擾相對要小，免疫前平均阻斷率為86.1%，一免后稍有下降為73.3%，二免后回升至81.4%。數(shù)據(jù)表明，E2基因工程苗受母源抗體的干擾較小，可減少豬只的免疫空窗期。
    3、分析與討論

    母源抗體可以被動保護仔豬免受微生物的感染，但同時也會干擾免疫接種后抗體的產(chǎn)生，因此，確定斷奶仔豬疫苗免疫的適當日齡及制定合理科學的免疫程序非常關鍵。據(jù)報道，母源抗體的半衰期為14d，豬場常憑經(jīng)驗將首免時間定在20日齡左右，但這種免疫方法并不能有效消除母源抗體的干擾，從該研究的數(shù)據(jù)也可反映這一點。

    不同區(qū)不同批次的仔豬母源抗體水平參差不齊，雖然A區(qū)整體水平已到達免疫的臨界點（平均阻斷率47.8%，陽性率53.3%），但抗體水平分布屬于兩端，在35日齡時，部分豬（阻斷率＜40%）已屬于免疫空窗期，一免后，保護率并沒有很快上升，直到二免后，抗體水平才上升（平均阻斷率86.6%）（圖2），而另一部分高水平的母源抗體直接抑制了疫苗的效果，甚至干擾到二免的效應（免疫前、一免后、二免后的阻斷率分別為86.6%、58.4%、67.3%）（圖3），因此這也解釋了目前保育、育肥豬群豬瘟抗體水平低下的一個原因。

    E2包膜糖蛋白是豬瘟病毒的主要保護性抗原，在CSFV感染時誘導中和抗體的產(chǎn)生，E2蛋白已被證明是一個有效的免疫原，有研究顯示該蛋白重組疫苗可抵抗母源抗體的干擾。該研究結果也表明了這點，免疫前陰性豬在第一次接種E2重組苗后，全部轉陽（圖2），而在高水平的母源抗體條件下，E2重組疫苗并未受到較大干擾（免疫前、一免、二免后的阻斷率分別為86.1%、73.3%、81.4%）（圖3）。

    2017年農(nóng)業(yè)部出臺了《國家豬瘟防治指導意見（2017-2020）》，對豬瘟防控提出了新的要求，2020年底全國所有豬場和部分區(qū)域達到豬瘟凈化標準，并進一步擴大豬瘟凈化區(qū)域范圍。而現(xiàn)在使用的兔化弱毒苗并不具備區(qū)分自然感染與疫苗接種的特征，所以安全、高效具有標記的新型豬瘟疫苗是未來實現(xiàn)豬瘟凈化的關鍵。

    E2重組疫苗是最具潛力的，目前在歐洲，重組E2蛋白亞單位疫苗已經(jīng)商業(yè)化，如默沙東動物保健公司生產(chǎn)的Porcilis®Pesti，用該疫苗接種，結合瑞士Prionics公司的豬瘟Eens抗體檢測試劑盒，用于豬瘟的凈化。

    在國內(nèi)，E2疫苗還處在試驗階段。該研究的數(shù)據(jù)表明E2基因工程苗既能產(chǎn)生較好的免疫應答反應同時又可對抗母源抗體的干擾，為E2新型苗的研究提供參考依據(jù)。

   （何振華、顏愛等  豬業(yè)科學）