顧江萍 上海交通大學(xué)

    使用傳統(tǒng)免疫方法免疫母豬，母乳提供的免疫不能從根本上解決豬群，特別是仔豬的免疫問題；中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所研制的TGE和豬流行性腹瀉(PED)二聯(lián)滅活苗解決了疫病潛在擴(kuò)大、蔓延的危險性，但其免疫應(yīng)答產(chǎn)生較慢，不能激發(fā)產(chǎn)生以IgA抗體為主的黏膜免疫反應(yīng)，且成本昂貴。因此進(jìn)行TGEV基因工程活載體疫苗研制，研制TGE和PED基因工程多價疫苗及轉(zhuǎn)基因植物疫苗，實現(xiàn)口服疫苗免疫，必將有廣闊的應(yīng)用前景。

     S基因分子生物學(xué)研究的進(jìn)一步發(fā)展和應(yīng)用，不僅促進(jìn)了其結(jié)構(gòu)蛋白、核酸結(jié)構(gòu)、基因表達(dá)方式等方面研究的深入，也促進(jìn)了基于S基因進(jìn)行轉(zhuǎn)基因研制新型基因工程疫苗的發(fā)展。目前TGEV基因工程疫苗均還處于研究階段，要投入生產(chǎn)使用均還存在很多問題。目前研究結(jié)果表明，S基因的合理剪切對于免疫原性沒有太大影響，但基因剪切后提高了可操作性，更有利于和某些信號肽基因拼接重組，從而提高S蛋白的表達(dá)量。運用發(fā)展反遺傳技術(shù)構(gòu)建TGEV感染性克隆，研制感染性克隆疫苗也是今后疫苗研究開展的一個方向?？傊?，如何使得S蛋白高效表達(dá)，將研究技術(shù)應(yīng)用到實際疫苗生產(chǎn)中，仍是TGEV基因工程疫苗研究的重點。

    豬傳染性胃腸炎是一種古老的病毒性腸道傳染病，近年來對其病原TGEV開展了大量的研究，結(jié)構(gòu)性蛋白如S、M、N蛋白的功能已研究的較為深入，非結(jié)構(gòu)性蛋白的功能至今仍不清楚。本文通過對上海分離到毒株培養(yǎng)，擴(kuò)增得到ORF7基因，并與其他毒株進(jìn)行了核苷酸與氨基酸序列比對分析，對其存在的突變做一些推理，探索非結(jié)構(gòu)性蛋白ORF7基因在病毒致病與復(fù)制過程中的作用與功能；并對分離到的毒株進(jìn)行了系統(tǒng)進(jìn)化分析，得出國內(nèi)TGEV毒株的親緣關(guān)系，為今后TGEV分類提供了研究依據(jù)。

    豬傳染性胃腸炎在世界各地廣泛存在，在我國也廣泛流行，各個年齡段豬均易感染，1周齡以內(nèi)仔豬死亡率高達(dá)100%，給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。該病多與其他胃腸道疾病混合感染，臨床上難以分辨，診斷難度大，因此建立一種快速、便捷的實驗室診斷方法十分必要。熒光定量PCR方法以其快速、定量、靈敏、高通量等優(yōu)點逐漸成為診斷方法中的重要技術(shù)，本研究針對TGEVS基因建立了SYBRGreenRT-PCR檢測方法，并對臨床樣品進(jìn)行了檢測，成本低，耗時少，適合用于豬場大通量的樣品檢測。