顧江萍 上海交通大學
豬傳染性胃腸炎是一種引起豬嘔吐、腹瀉、失水的高接觸性腸道疾病，獸醫(yī)研究發(fā)現豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）屬于冠狀病毒科、冠狀病毒屬成員，病毒粒子呈多形性，大多為圓形或橢圓形，直徑為60~160nm，表面有囊膜，囊膜上覆有花瓣狀纖突，病毒粒子分為3個結構層次，分別為表面雙層囊膜、內部核心結構及核心結構降解所釋放出來的核衣殼。在脂質雙層中穿插有三種蛋白：膜蛋白(M蛋白)、纖突蛋白(S蛋白)和小囊膜蛋白(sM蛋白），內部是核衣殼蛋白（N蛋白）。
本病毒能在豬腎、豬甲狀腺、豬睪丸等細胞上很好增殖。對乙醚、氯仿、去氧膽酸鈉、次氯酸鹽、氫氧化鈉、甲醛、碘、碳酸以及季銨鹽類化合物等敏感；不耐光照，糞便中的病毒在陽光下6小時失去活性，病毒細胞培養(yǎng)物在紫外線照射下30分鐘即可滅活。病毒對膽汁有抵抗力，耐酸，弱毒株在pH3時活力不減，強毒在pH2時仍相當穩(wěn)定；在經過乳酸發(fā)酵的肉制品里病毒仍能存話，但不能在腐敗的組織中存活。病毒對熱敏感，56℃30分鐘能快速滅活；37℃4天喪失毒力，但在低溫下可長期保存，液氮中存放三年毒力無明顯下降。
TGEV基因組為不分段的單股正鏈RNA，其5'端具有帽子結構，3'端具有poly(A)尾，基因與核蛋自相結合，不分節(jié)段，具有感染性。整個基因組全長約為2.85×104bp，分子質量為6×103ku分為7個區(qū)，每個區(qū)有一個或兩個開放閱讀框(ORFs)，亞基因組mRNAs之間有保守序列將其分開，基因組結構為5'-ORFla+ORFlb-S-ORF3a-ORF3b-sM-M-N-ORF7-3’。位于3端約8.3kb的核苷酸由6個基因組成，其中基因3由2個ORFs(ORF3a和ORF3b)構成，ORF2、ORF4、ORF5和ORF6分別編碼病毒的纖突(S)蛋白、小膜(sM)蛋白、膜(M)蛋白和核衣殼(N)蛋白。5'端約20kb為基因1，由ORFla和ORFlb組成，編碼病毒的聚合酶。ORFla上游有一個3個密碼子長的ORF(upstreamORF，uORF)對ORF1a和ORFlb轉譯起調控作用，最大的非編碼區(qū)為位于3’端下游ORF7基因，不含poly(A)延伸的280個核苷酸。TGEV基因組中編碼區(qū)的位置接近，整個基因組緊密包裝，幾乎沒有重疊；基因間間隔區(qū)大多由0~15個堿基組成，每個間隔區(qū)均有1個由六聚體或八聚體組成的一致(間隔)序列。該序列在不同的mRNA之間具有高度的同源性，是引導序列一聚合酶復合體轉錄亞基因組mRNA的起始信號；在引導RNA序列與基因內部起始位點之間有7~18nt是相同的，這些序列的特點與其他冠狀病毒的先導引物轉錄有關。最大的非編碼區(qū)為位于3'端N基因上游不含poly(A)延伸的280個核苷酸。有研究表明，TGEV基因組具有很高的重組率，這一現象類似于分節(jié)段的RNA病毒。
TGEV的親代RNA可以直接呈現mRNA的作用，同時也是合成互補(負鏈)RNA的模板，負鏈RNA又反過來復制子代RNA。因此，負鏈RNA是合成mRNA及子代病毒基因組的模板。TGEV基因組的整個復制和轉錄循環(huán)是在細胞漿中進行的，從病毒衣殼中釋放出來的RNA呈現mRNA的作用，指導翻譯病毒早期特異性RNA聚合酶(此RNA聚合酶最終不結合于病毒粒子中)，在病毒自身RNA聚合酶的作用下先合成互補的負鏈RNA和7個亞基因組。因此，在感染細胞內可檢測出4種病毒特異性的RNA：基因組RNA、雙鏈型復制中間體、分散存在的mRNA和不完全RNA。
在感染TGEV的細胞中檢測出23.6kb(mRNA1)、8.4kb(mRNA2)、3.8kb(mRNA3)、3.0kb(mRNA4)、2.6kb(mRNA5)、1.9kb(mRNA6)和0.7kb(mRNA7)7種mRNA分子，并且mRNA1、mRNA2、mRNA、mRNA5和mRNA6的轉譯產物分別是病毒聚合酶(po1)和S、sM、M、N4種結構蛋白。通過生物素標記寡核苷酸方法分離TGEV的亞基因mRNA來檢測復制過程中早期、中期、后期mRNA的含量，發(fā)現整個復制過程中都含編碼TGEV核衣殼蛋白的mRNA6，在整個復制過程中，所有mRNA的種類隨時間而變化。
