張靜 上海交通大學(xué)
基因工程亞單位疫苗由于只含有病原體的一種或幾種產(chǎn)生保護(hù)性免疫應(yīng)答所必需的免疫原成分，接種動(dòng)物后原則上都可使之獲得抗體從而具有抵抗病原體感染的能力。因此，在理論上，獸醫(yī)可將編碼高度危險(xiǎn)和致病的病原體的免疫原性蛋白質(zhì)的基因轉(zhuǎn)移到無致病且無害的微生物中，擴(kuò)大疫苗控制疫病的使用范圍。此外，基因工程亞單位疫苗不含有感染性組分，無須滅活，無致病性，且易于大規(guī)模生產(chǎn)，成本低廉，使用安全方便。
由于目前SS2的致病機(jī)理尚未清楚、對(duì)其致病因子也不能完全確定、且抗原類型復(fù)雜，阻礙了SS2亞單位疫苗研制的順利進(jìn)行，因此鑒定和分離該病原菌關(guān)鍵的免疫原和毒力因子是研究SS2亞單位疫苗的前提和基礎(chǔ)。近些年來，隨著分子生物學(xué)的快速發(fā)展，特別是SS2的全基因序列的測(cè)序工作完成，使得人們從分子水平理清了該菌的基因組結(jié)構(gòu)，尤其是與致病性有關(guān)的基因，為最終揭示其發(fā)病和免疫的分子機(jī)理，開展針對(duì)SS2感染的傳統(tǒng)疫苗的改進(jìn)和新疫苗的研究，提供了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
2005 年李明等將 SS2 MRP 和 EF 串聯(lián)表達(dá)，融合蛋白對(duì)新西蘭兔的免疫保護(hù)率為 50%（2/4），明顯高于單個(gè)蛋白對(duì)照組。2006 年范紅結(jié)采用 PCR 技術(shù)，克隆了馬鏈球菌獸疫亞種的類 M 蛋白基因 szp 片段和 mrp 基因片段，并進(jìn)行了基因融合和表達(dá)，動(dòng)物試驗(yàn)表明，重組蛋白對(duì)豬有 60%的免疫保護(hù)率，經(jīng)過優(yōu)化和添加適當(dāng)佐劑，其可作為預(yù)防豬鏈球菌 2 型和馬鏈球菌獸疫亞種有效的重組亞單位二聯(lián)苗。利用 PCR 技術(shù)將馬鏈球菌獸疫亞種 ATCC35246 株類 szp 基因583-1063 位堿基和 SS2 HA9801 株 mrp 基因 298-827 位堿基的片段拼接，可表達(dá)分子量為 60kDa 的融合蛋白，表達(dá)的融合蛋白同時(shí)具有類 M 蛋白和 MRP 的抗原性。純化蛋白免疫兩組仔豬，可提供 60%的免疫保護(hù)率。2007 年王華等發(fā)現(xiàn)大小為 60kDa 的 SS2 溶血素與 38kDa 蛋白基因的串聯(lián)表達(dá)蛋白具有免疫反應(yīng)活性，可提供 BALB/c 小鼠比單個(gè)表達(dá)蛋白組高的約 70%的保護(hù)率，能夠?qū)?SS2強(qiáng)毒株的攻擊起到保護(hù)作用。
將兩個(gè)或以上的具有免疫保護(hù)作用的抗原蛋白進(jìn)行串聯(lián)表達(dá)，可能提高其免疫原性，是目前亞單位疫苗的開發(fā)主要發(fā)展方向。由MRP等與粘附相關(guān)的，并具有較好免疫原性的蛋白研究發(fā)現(xiàn)，將此類蛋白組合制備而成的基因工程亞單位疫苗可能從根本上即粘附定植階段去阻斷細(xì)菌感染。
已有研究證明，豬鏈球菌2型亞單位疫苗能對(duì)相應(yīng)的疾病產(chǎn)生有效的保護(hù)甚至對(duì)不同血清型的攻擊也有交叉保護(hù)作用，但目前仍無商品化的SS2亞單位疫苗?？梢灶A(yù)測(cè)的是，基因工程亞單位疫苗作為現(xiàn)代分子生物學(xué)和分子免疫學(xué)的一個(gè)主要發(fā)展方向，在SS2引發(fā)的各種疾病的免疫預(yù)防方面將發(fā)揮重要的作用，具有廣泛的應(yīng)用前景。
鑒于今后疫苗研究的發(fā)展趨勢(shì)，本研究將繼續(xù)探求二氫硫辛酰胺脫氫酶的生物活性及功能，并進(jìn)一步驗(yàn)證串聯(lián)表達(dá)的蛋白GAPDH-MRP-HM6在仔豬上的保護(hù)效果，為豬鏈球菌亞單位疫苗的篩選工作提供參考。
